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滅菌是(shì)指用物理或化學(xué)的方法,殺死物體表麵和孔隙內的一切微生物(wù)或生物體,即把所有生命的(de)物質全部殺死。常用的滅(miè)菌方法(fǎ)可分為物理的(de)和化學的兩類:物理方法如幹熱(烘(hōng)燒和灼燒)、濕熱(常壓(yā)或高壓蒸煮)、射線處理(超聲(shēng)波、微波)、過濾、清洗和大(dà)量無(wú)菌水(shuǐ)衝洗等措施。化學方法是使用甲醛、過氧化氫、高錳(měng)酸鉀、次氯酸鈉(nà)、抗菌素(sù)、酒(jiǔ)精化學藥品處理等。
微生物檢(jiǎn)查培養基常用的滅菌方法主要(yào)是濕熱滅(miè)菌和過濾除菌。
1、濕熱滅菌:
蒸汽(qì)在冷凝時(shí)釋放出大量潛能,並且蒸汽具(jù)有強大穿透力,蒸汽的濕熱(rè)破壞菌(jun1)體蛋白質和核酸的(de)化(huà)學鍵,使酶失活,微生(shēng)物因代謝障礙而死亡。濕熱滅菌的效果(guǒ),取決於致死溫度和致死時間。致死溫度是殺(shā)滅微(wēi)生物的極限溫度。致死時間是在(zài)致死溫度(dù)下殺滅全部(bù)微生物所需時間。
高壓蒸汽滅菌適(shì)合於(yú)耐高溫培養基、接種器械和蒸餾水的滅菌(jun1)。培養基分裝後應立即滅菌,應在當天內完成滅菌工作,不可過夜。消毒時間不宜過(guò)長,也不能超過規(guī)定的壓力範圍,否則有機物(wù)質就會在高溫下分解,失(shī)去營養作用,也會(huì)使培養基變質、變色,甚至難以凝固。
培養基配製後,應按驗證過的高壓滅菌(jun1)程序滅菌。2015版《中國藥典》第三次公示稿,1106 非無(wú)菌產品微生物限度檢查:控製菌(jun1)檢(jiǎn)查法中,列出部分培(péi)養基的滅菌條件,如下表所示:
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培養基名稱 |
滅菌條件 |
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腸道菌(jun1)增菌(jun1)液體培養基 |
加熱至100℃ 30分(fèn)鍾,立即冷卻 |
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紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養基 |
加熱煮沸(不能在高壓滅菌器中加熱) |
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RV 沙門菌(jun1)增菌液體培養基 |
滅菌溫度不能超過115℃ |
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木糖(táng)賴氨酸脫氧膽(dǎn)酸鹽瓊脂培養基 |
加熱至沸騰(不能在高(gāo)壓滅(miè)菌器中加熱) |
其他未明確標(biāo)示滅(miè)菌方法的培養基,按供應商標簽所示滅菌方(fāng)法滅(miè)菌或按驗證過的高壓滅菌程序(xù)滅菌(jun1)。
2、過濾除(chú)菌:
一(yī)些抗(kàng)生素及有機物等,遇熱容易分解,不能與培養基一起進行高溫(wēn)滅菌(jun1),而要(yào)使用細菌過濾器濾去(qù)其中的雜菌,例如含(hán)抗生素的沙氏葡(pú)萄糖瓊脂(zhī)培養基。過濾後的溶液要立即加入培養基中,若為液體培養(yǎng)基,可在培養(yǎng)基冷卻至30℃時加入;若為固體培養基,必須在培養(yǎng)基凝固之前(50-60℃)加入,振蕩使溶液與其他(tā)成分混合均勻(yún)。
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