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一、要樹立科學必須真實的（de）觀念，實驗（yàn）態度要端正（zhèng）。
 
要懷著一顆為了出具真實、準確，可信數據而敬畏的心去申請能力驗證。
實驗要求科學嚴謹,實驗（yàn）要（yào）預先充分練習和實踐。能力驗證是對（duì）實驗室綜合實驗水平（人（rén）員，設備，環境等多（duō）因素）的評價。
首先要選好實驗項目，找到（dào）與之配套的方（fāng）法，進行充分的方法驗證，從檢測員能力，儀器設備性能，校檢結果是否（fǒu）能滿（mǎn）足實驗需要，實驗檢測多次實驗，檢測環境是否進行了充分的考慮（lǜ），實（shí）驗（yàn）確認好（hǎo）實驗項目，認真學習標準，理解標準，並做到標準所規範的步驟，並對自己實驗有了一（yī）定的信心後再去申請能力驗證為宜。
舉（jǔ）例：某實（shí）驗室未經（jīng）過充分實驗方法確認，實驗平時做的也少，直接申請了能力驗證。實驗過程生疏，照（zhào）方抓藥，手忙腳亂（luàn），造成稀釋梯度不夠，平板幹（gàn）燥，菌落蔓延，無法出具具體數（shù）值，實驗失敗。
 
二、實驗室收到盲樣菌株標本後（hòu），首先應做的事情利用（yòng）集菌儀或者微（wēi）生物檢查儀製（zhì）備樣品。
 
1、檢查標本的性狀和確認包裝情況，然後按照要求去（qù）能力驗證（zhèng）網站提交收到樣品情況。
2、仔細閱讀參指導書，包括標本如何保存（cún）的信（xìn）息（xī），進（jìn）行實驗室內部工作分配，明確工作任務和要求。
3、實驗前應（yīng）嚴（yán）格按（àn）照作業指導書的要求製訂檢驗流程，認（rèn）真（zhēn）做好準備工作（zuò），包（bāo）括實驗中需要使用（yòng）的器皿，須提前做好清潔滅菌。
 
三、能力驗證樣品處理。
 
1、定量項目，西林瓶內樣品（pǐn）不可分割，應全部用於檢測。一般參考書指導的是加（jiā）40mL稀釋液製成40mL樣品。
 
2、定量項目樣（yàng）品（pǐn）稀釋。指導書標明了稀釋範圍的，在稀釋範圍左右各加1個稀釋度（dù）進行；書上沒有稀（xī）釋（shì）範圍（wéi）的，多做稀釋（shì）倍數，選（xuǎn）擇合（hé）適的稀釋倍（bèi）數計數（一（yī）般可（kě）稀釋至（zhì）10^-8）。
 
3、定量項目（mù），除了要多做（zuò）稀釋倍數外，同時同一稀（xī）釋度要多倒幾皿，從原理上來講，檢測過程屬於隨機抽樣檢（jiǎn）查，平板越多，數據越接近真（zhēn）值。考慮性價比，又（yòu）不可能一直瘋狂一個稀釋度很多平板，所以能力驗證（zhèng）時候多倒幾皿（mǐn），求好結果。
 
4、定性項目有一些重要步驟。
a、增菌（jun1）及分離步驟尤其重要。選擇合適的增菌液和分離用培養基對目標菌的檢出非常關鍵，選擇兩種以上的增菌液和分（fèn）離用培（péi）養基對菌株作直接分離和增菌後分離。
b、劃（huá）線分離十分重要，要把增菌液（yè）中的目標菌盡量多的表達（dá）出來，要分出單個菌落並盡可能多挑取可疑菌落，確保分離到目（mù）標菌。
c、生化試驗和血清學試驗以營養瓊脂平板上的純培養細菌為好。
 
四、實驗過程一（yī）定要做陰（yīn）陽對照，全程空白對照。
 
再厲害的高（gāo）手（shǒu）也有失手和看走眼的時候，所以陰陽對照就是一麵鏡子。對於一些熒（yíng）光（guāng）染色後進（jìn）行判讀的實驗顯得尤為重要。
這裏掃盲一（yī）個（gè）誤區，定量計數測菌數（shù）時，17C一起草會認為空白（bái）就是直接取1mL無菌水然後加入到平板裏，然後混菌倒皿，這（zhè）是錯誤的。因為這樣做的話，隻能模擬證明稀釋後倒（dǎo）平板這（zhè）一步（bù）有沒有汙染。而（ér）無法證明從樣品稱取-樣品稀釋時（shí）候的汙染質控情況。所以要（yào）做全程空白對照。
全程空白的含（hán）義就是把無菌液當成樣品，然（rán）後走一遍實驗過程。如果嚴格這麽做的話，又會（huì）走向（xiàng）另一個極端，所以全程空白隻從取樣開（kāi）始至（zhì）稀釋10^-1做了簡化，而不做後續稀釋空白樣的混菌實驗。
在有些其他實驗（yàn）時候（hòu），會有樣品空白以及稀釋液空白（bái），比如大氣環境NOx和SO2的檢測，有興趣的可以去看看（kàn），對於全程空白的意義理解有（yǒu）更好的幫助。
 
五、培養基方麵需要注意（yì）的（de）地方。
 
1、培養基配製充分混（hún）勻後再滅菌。
正確（què）做法是用一（yī）部（bù）分水攪拌均勻後，再加入剩餘水量，混勻後滅（miè）菌或分裝。
 
2、混菌法倒皿要充分混勻。
培養（yǎng）基倒完（wán）要左5圈右5圈（混勻速度一定要慢，目（mù）的是——避免培（péi）養（yǎng）基波動到二皿接觸（chù）的縫隙部分造成後續汙染），找較水平位置冷卻凝（níng）固（gù）。
 
3、微生物限度過濾結束後培養基要不要覆蓋問題。
覆（fù）蓋的目的是為了阻止活菌在培養基表層通（tōng）過鞭毛（máo）移動，造成片狀生長，無法計數這一不（bú）利現象的發生。這裏（lǐ）可以發揮主觀能動性-對於不運動的菌，可以不覆蓋，對於運動的菌覆蓋。
總結一下：
a長期檢測同一種樣品（pǐn），不覆蓋並無蔓延現象，不覆蓋；長期檢測蔓延選擇了覆蓋（gài），一直覆蓋。
b未知樣品，進行覆蓋（gài）和不（bú）覆蓋的比對實驗，然後決定以後同樣的樣品是否需要覆（fù）蓋。養成（chéng）經驗。
c能力驗證（zhèng）實驗，覆蓋和不覆蓋的都做，不要（yào）吝惜那麽一點點培養（yǎng）基或耗材，畢竟能力驗證實驗做的漂亮才是實驗室（是室而不（bú）是（shì）人！）能力（lì）的綜合體現。
 
4、培養過程防止平皿（mǐn）幹燥。
培養過程中培養基可以倒的適當（dāng）厚一些，比如25mL。培養箱（xiāng）底部接一個不鏽（xiù）鋼盆，裝上足量無菌水（沒有（yǒu）就去買幾瓶什麽的水倒裏麵）。
 
5、培養完成（chéng）要保留實驗平皿（mǐn）和其他相關材料。
作（zuò）為能力驗證，原始記錄及實驗報告還沒出具完成，各種材料還是保留至數（shù）據出具後較好，便於出現問題現查原因，馬上補救。
 
題外話：很多（duō）檢（jiǎn）測員（yuán）等結果出了問（wèn）題然後到網絡上（shàng）來求救，結果一問平皿已經洗（xǐ）掉了，那就不知道是什麽狀況了。有時候你問她她（tā）還會振振有詞的講：10^-1，10^-2都蔓延（yán）了，不洗掉幹嘛，10^-5，10^-6沒（méi）長菌，不洗掉（diào）幹嘛（ma）？我（wǒ）當時真（zhēn）的無語，也不想多說話（huà）就沒繼續講了。現在我回答一下這個問（wèn）題：我（wǒ）要你一套完整梯度濃度的（de）平皿，可以看出你10倍稀釋梯度是（shì）不是穩定，還有蔓延是個什麽狀況，到底有多少（shǎo），是一片還是局部還是（shì）很小一部分，然後根據整（zhěng）體（tǐ）數據估算結果（guǒ）（當然實驗做成這樣也基本算失敗了，因為實驗沒有做到你可控（kòng）的範圍），是補救的一種（zhǒng）（並不可取，屬於垂死掙紮）。定量實驗時，當天做完的稀（xī）釋樣品也要放冰箱裏，雖然實驗要求不能複檢或重複檢測，但作為微（wēi）生物專業你是知道菌放在2-8℃下並不會長多少，如果第二天一看數據有蔓延或疑問，馬上再做一次，這樣也應該在誤差範（fàn）圍內（nèi）出數。
 
6、 實驗培養過（guò）程勤觀察。
微生物培養過程一般需要（yào）幾小時到幾十小時，要利用這段時（shí）間觀察培養箱及菌生長情況，比如溫度是否穩定，培養室內（nèi）濕度如何等等，多思多看，準備預案。方有可能得到與盲樣一致的實驗結果。
原始記錄（lù）應有條理、思路清晰,完整準確地記錄菌株鑒（jiàn）定檢驗的全過（guò）程,原始記錄要包含時間、試驗現（xiàn）象、試驗結果三個要（yào）素，方便試驗（yàn）出現問題的查找。